1.2 方法
1.2.1 α－地贫的筛查策略 采用血液学筛查法和gap－PCR法对样品分别进行表型和基因型分析，以双盲法进行。
1.2.2 α－地贫的表型筛查 诊断α－地贫主要依据红细胞指数和HbA2定量测定，辅以血清铁检查以排除缺铁性贫血。红细胞指数测定采用全自动血细胞计数仪（ SWELAB AC－970，瑞典）； HbA2定量采用微注法（美国 Helena Laboratories公司）。血清铁测定采用比色法进行。
α－地贫表阳性样品的诊断指标为：MCV＜80fl和/或MCH＜27pg；HbA2正常＜3.5%；血清铁≥10.7μmol/L。在上述MCV和/或MCH指标阳性时，若HbA2≥3.5%，则诊断为β－地贫表阳性。缺铁性贫血的诊断标准见文献［7］。
1.2.3 DNA样品抽提和基因型分析 用酚－氯仿法抽外周血白细中的DNA。－－SEA、－α3.7和－α4.2三种基因型的检测则按第一军医大学医学遗传学教研室建立的gap－PCR方法进行［5，6］。 RDB技术［8］用于β－地贫疑诊病例的基因分型。
1.2.4 Southern blot分析 从gap－PCR确定为αα/αα、－－SEA/αα、－α3.7/αα和－α4.2/αα基因型的DNA样品中分别随机抽取10、5、3和2份依文献［9］进行Southern blot分析，以佐证gap－PCR方法的可靠性。
2 结果
2.1 α－地贫表阳性检出率 在353份韶关市户籍的婚检样品中，经血液学分析检出α－地贫表型阳性样品23例，此外还检出β－地贫阳性病例11例。缺铁性贫血7例（7例均为女性），由此得出α－地贫、β－地贫和缺铁性贫血的检出率分别为6.52%、3.11%和1.98%。
2.2 gap－PCR检测结果 在上述样品中，用gap－PCR技术分别检出23、8和3例基因型为－－SEA、－α3.7和－α4.2的α－地贫样品，由此计算该市户籍人口中此3种α－地贫的基因携带率分别为6.52% 、2.27%和0.85%，人群中总的α－地贫基因携带率为9.63%。值得一提的是，有10例缺失型α－地贫样品分别发现自表型正常（7例）和缺铁性贫血样品（3例）中。余319份样品（包括11例β－地贫表型阳性的样品）未检出这3 种α－地贫基因。
2.3 Southern blot分析结果 20份随机抽取的不同基因型 DNA样品经Southern blot 分析结果与gap－PCR法完全一致。
3 讨论
我们采取双盲法，对例行婚前医学检查的韶关市户籍人群中353份随机血样分别进行了α－地贫携带者的血液学表型和gap－PCR分子筛查。结果显示，韶关市户籍人群中α－地贫表型阳性检出率为6.52%，而gap－PCR分子筛查的阳性率为9.63%。这与最近我们完成的1006份该市户籍新生儿脐血连续样品α－地贫的分子流行病学调查结果（10.44%）完全吻合。在检出的105例α－地贫基因中，－－SEA /αα、－α3.7/αα及－α4.2/αα这3种常见的α－地贫占97.1%（结果已发表）。这说明本研究所取的样品具有较好的代表性，同时也提示本文将上述3种α－基因作为α－地贫的分子筛查对象是有临床意义的。
经基因分析确诊的34例α－地贫阳性的样品中，血液学分析只筛查出23例，假阴性11例，其假阴性率高达32.3%（11/34）。由此可看出，血液学筛查法最大的缺陷是漏诊，在本文分析的353例临床样品中，血液学方法共漏检了11例α－地贫基因携带者，故用传统血液学分析法筛查α－地贫的总漏检率为3.12%（11/353）。
正如所预期的，上述漏检样品中，主要是表型为静止型α－地贫样品的贡献所致（占10/11）。众所周知，成人静止型α－地贫用传统血液学筛查法难以诊断，故本法所具有的α－地贫高特异性和灵敏性的诊断价值，主要体现在对静止型α地贫的诊断上。由于－－SEA与－α3.7或－α4.2基因组合可能产生有严重临床后果的HbH病，为防止在以优生为目的人群筛查中由于漏检而发生不良后果，笔者建议在有条件的地区或单位，可将gap－PCR分子筛查法直接用于临床一线α－地贫的筛查。而以血液学筛查法作为主要技术手段检测α－地贫时，要特别谨慎。此外，缺铁性贫血也属于小细胞低色素贫血，当α－地贫合并缺铁性贫血时血液学指标易造成错误诊断，而α－地贫的分子筛查可对此作出准确的诊断。为了防患于未然，建议在地贫高发区对缺铁这一常见的孕妇病症，需进行α－地贫的分子诊断。本文在表型正常的样品中检出1例－－SEA基因携带者，均属南方地区也较常见的α－地贫复合β－地贫病例，这一结果提示，α和β复合型地贫可由于α和β珠蛋白肽链合成趋于平衡而减轻异常表型，故用gap－PCR在表型正常的样品中筛查发现这类型病例是有价值的。
鉴于α－地贫不象β－地贫那样有典型的血液学表型指征，需靠多项指标才能作出综合判断，且存在漏诊的问题，故本文介绍的方法在特异性和准确性上具有明显的技术优势，且证明在临床实验作为一线筛查方法是可行的。但其推广应用尚有待进一步简化DNA模板的制备和建立能同时筛查多种α－ 地贫基因的一管多重gap－PCR的技术。
【参考文献】
1 Higgs DR，Vickers MA，Wilkie AOM，et al.A reivew of the molecular genetics of the human α－globin gene cluster.Blood，1989，73(4):1081－104.
2 肖维威，徐湘民，徐钤.中国人缺失型α地中海贫血的分子基础及产前基因诊断.第一军医大学学报，1998，18(1):68－72.
3 曾瑞平，胡彬，金龙金.广东地区血蛋白H病基因型分析及高胎儿基因诊断.中华医学遗传学杂志，1996，13(5):266－268.
4 Chang JG，Lee LS，Lin CP，et al.rapid diagnosis α－thala