Gap-PCR作为临床α-地中海贫血携带者筛查技术的应用评价*
Gap-PCR作为临床α-地中海贫血携带者筛查技术的应用评价*
作者：陈亚军，陈培院，夏玉英，龚小倩
【摘要】 目的 评价检测中国人3种常见的缺失型α-地中海贫血（地贫）基因的gap-PCR作为临床一线α-地贫携带者筛查技术的可行性。方法 以双盲试验对随机抽取的353份血样同时采用gap－PCR作为筛查技术和血液学分析法分别检测α－地贫基因型和α－地贫表型，并以Southern blot分析法作平行对照分析。结果 在353份样品中，用gap－PCR法检出3种常见的α－地贫基因--SEA、－－α3.7的－－α4.2分别为23、8和3例，据此该市人群中α－地贫的基因携带率为9.63%。在这些阳性样品中，有8例和3例分别检出自血液学表型正常（8/11）和缺铁性贫血（3/11）样品。这些结果与Southern blot分析完全一致。血液学表型筛查法检出其中的23例，该法的假阴性率为32.3%。因血液学表型筛查漏检了10例静止型和1例轻型α－地贫样品，故此法总的漏检率为3.12%。结论 与血液学筛查法比较，gap－PCR分子筛查技术更具有特异性和可靠性，是临床上进行α－地贫基因携带者（尤其是静止型α－地贫）筛查的可选的一线技术。
【关键词】 α-地中海贫血 遗传筛查 聚合酶链反应 分子诊断
Evaluation of clinical application of gap－PCR as a routine method for α－thalassemia carrier detection
【Abstract】 Objective To evaluate the feasibility of using gap－PCR for routine screening of α－thalassemia in clinical laboratory.Methods A total of 353 clinical blood samples randomly collected from the population of Shaoguan city were screened for α－thalassemia determinants with hematological and gap－PCR method respectively in a double－blind manner. Parallel analysis with Southern blot was performed to verify the genotyping results by PCR.Results Of the 353 samples tested ，3 common α－thalassemia genes with genotypes of －－SEA/αα，－α3.7/αα and-–α4.2/αα were detected in 23(6.52%)，8(2.27% )and 3(0.85%)cases respectively by gap－PCR，including 8 cases with normal phenotype and 3 cases of iron－deficiency anemia.The overall incidence of α－thalassemia was 9.63% in the population Shaoguan city ，as determined by gap－PCR，in total agreement with the results by Southern blot.Only 23 of the 34 α－thalassemia cases were identified by hematological analysis，which had false－negative rate of 32.3%.10 silent α－thalassemia and 1 mild α－ thalassemia cases failed to be detected by hematological analysis，resulting in a rate 3.12% for failure of detection.Conclusion Gap－PCR method is specific and feasible as a better alternative for thalassemia screeing，especially advantageous in detecting silent carriers in comparison with hematological method.
【Key words】 α－thalassemia genetic screeing polymerase chain reaction molecular diagnosis
α－地中海贫血（简称α－地贫）是由于α－珠蛋白基因的缺陷致α－珠蛋白肽链缺如或合成不足所引起的遗传性血液病。其基因突变具有高度的异质性，主要为α－珠蛋白基因大片断缺失（缺失型），少数为碱基替代、几个核苷缺失或插入（非缺失型）［1］。目前世界上已报道了至少50种不同种族人群中的缺失型α－地贫基因，中国人中有7种［2］，其中--SEA、－α3.7和－α4.2为中国人最常见的α地贫突变类型。－－SEA基因自身或与－α3.7（或与－α4.2）基因相互组合可分别产生致死性的Hb Bart’s 水肿胎和严重影响生存质量的HbH［2］病。鉴于我国南方人群中α－地贫基因有很高的携带率［3］，且此病尚无理想的根治方法，通过人群筛查和遗传咨询，对那些携有α－地贫基因的高风险家族实施产前诊断，是当前条件下控制α－地贫重症患儿出生的首选途径。传统α－地贫血液学筛查法是基于红细胞指数和血红蛋白电泳等多指标的综合分析法，虽可检出标准型α－地贫携带者，但却存在漏检在人群中占相当比重的静止型α－地贫的缺陷；而经典的诊断缺失型α－地贫的Southern blotting 技术虽然准确、可靠，但也存在操作复杂、耗时、需使用同位素等诸多弊端，使其难以用于临床实验室的筛查工作。本室基于跨越断裂点扩增策略［4］而建立的gap－PCR方法，可简便快速检测中国人常见的3种缺失型α－地贫突变（－－SEA、－α3.7和－α4.2）基因［5，6］。本文尝试将在特异性和可操作性上比较血液学分析法具有优势的这一技术，用于临床筛查α－地贫个体，以期为α－地贫的人群筛查提供新的技术选择。
1 材料与方法
1.1 研究对象
