针刺加当归芍药散治疗阿尔茨海默症的机制研究*
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2.3 造模方法
2.3.1 Scop所致痴呆大鼠模型 大鼠末次训练结束1h后除空白组外，均分别腹腔注射Scop 2mg/kg，空白组腹腔注射等容量生理盐水。
2.3.2 NaNO2所致痴呆大鼠模型 操作同上，均分别给各组每只大鼠皮下注射亚硝酸钠混悬液120mg/kg。空白组腹腔注射等容量生理盐水。
2.3.3 QA损毁海马CA1区所致痴呆大鼠模型 实验大鼠腹腔注射10%水合氯醛3.5ml/kg麻醉后，参照大鼠脑立体定位图谱［4］对双侧海马CA1区定位，用牙科打磨机钻开颅骨，将充灌2%滂胺天蓝醋酸钠溶液（0.5mol/L）的玻璃微电极插入至海马CA1区（AP－2.8mm，ML±1.0mm，DV3.0mm）通以阴极电流标记位置。用10%甲醛溶液灌流、固定脑组织后，取脑，连续冠状位冰冻切片，片厚50μm，中性红染色，显微摄影放大、观察定位。对另一组实验大鼠进行微量注射器垂直进针，以0.2μl/min的速度，将已配制的2μl QA溶液缓慢注入到海马CA1区，留针5min后缓慢退出，缝合皮肤，连续肌肉注射青霉素G钠［4×104U/(kg·d)］3天，以防感染。假手术组用0.01mmol/L磷酸盐缓冲液代替QA注射于海马CA1区。实验室温度维持在22～24℃。
2.4 实验指标活性测定 氨基酸类神经递质HPLC荧光检测法。NO、NOS、SOD、LPO、蛋白质等试剂盒分别购自南京建成及聚力生物工程研究所，严格按操作说明分别测试。丙二醛（ MDA）含量测试采用硫代巴比妥酸法，NO的代谢产物NO3-和NO2-含量用硝酸还原酶法。
2.5 数据统计处理 应用SPSS10.0统计软件，单因素方差分析（ANOVA）进行比较。
3 实验结果
3.1 Scop所致痴呆大鼠学习记忆的影响［5］
3.1.1 痴呆大鼠跳台测试 见表1。
表1 各组痴呆大鼠跳台测试参数比较 (x±s)
注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，与尼莫、针刺组比较#P＜0.05
结果表明：模型组与空白组比较，测试错误次数明显增多及潜伏期明显延长，差异有非常显著性(P＜0.01)。与模型组比较，针药组、针刺组与尼莫组测试错误次数均明显减少(P＜0.05或P＜0.01)，潜伏期延长，差异有显著性(P＜0.01或P＜0.05)，说明三组虽都可改善记忆获得障碍，而针药组与针刺组、尼莫组比较，潜伏期呈有意义的明显延长(P＜0.05)，说明针药组对改善Scop所致大鼠记忆获得障碍的作用较好。
3.1.2 痴呆大鼠水迷宫法测试 水迷宫法测试50只痴呆大鼠表明，模型组每天测试的错误次数明显多于空白组、针药组、针刺组、尼莫组(P＜0.01或0.05)。治疗第一天时，针药组错误次数(3.8±0.84)、尼莫组(4.0±0.84)显著低于针刺组(5.4±1.14)，P＜0.05。处理后7天内，针药组错误次数仍然处于较低水平(P＜0.05)，同时登陆时间及游泳时间也缩短；而模型组登陆时间显著较长。这些结果均说明，针药组、针刺组、尼莫组可改善Scop所致大鼠空间识别障碍，针药组改善能力较单纯针刺组强，与尼莫地平作用相近(P＞0.05)。
3.1.3 痴呆鼠大脑海马NO含量和NOS活性测定 见表2。
表2 5组大鼠NO含量、NOS活性及NOS/NO与迷宫训练登陆时间、错误次数的相关性
注：与模型组比*P＜0.05，**P＜0.01，与针刺组比#P＜0.05
从表2中看出，模型组NO含量和NOS活性比正常组显著升高(P＜0.05)，也比其它各组显著升高(P＜0.05或P＜0.01)，而模型组登陆时间也较其它各组明显延长(P＜0.05、P＜0.01)，说明脑组织内NOS活性升高及NO过量生成与大鼠学习记忆障碍有关。从登陆时间相关分析中可见，NO含量越高的大鼠，其登陆时间越长，成绩越差。针药组减少NO生成和抑制NOS活性作用优于单纯针刺组(P＜0.05＝，与尼莫地平组相似(P＞0.05)。
3.1.4 学习记忆障碍痴呆鼠大脑皮层AchE含量和Ach含量测定［6，7］ 见表3。
表3 各组痴呆大鼠AchE和Ach含量变化&n