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1.3.1 动物模型的建立 成年新西兰家兔10只，以常规方法感染1000条日本血吸虫尾蚴，于感染后42天剖杀，采用门静脉灌注法收集成虫。新鲜活虫立即用生理盐水漂洗3次，然后分别收集雌、雄虫。采用朱明东等［2］改进的虫卵分离新方法［2］，自兔肝获得纯净日本血吸虫虫卵，并收集、分装在洁净离心管内，置-20℃保存备用。
1.3.2 血吸虫雌、雄虫和虫卵粗抗原的制备 取雌虫450条、雄虫320条、虫卵0.8g，分别置匀浆器内（冰浴）匀浆15min；再置冰浴中超声粉碎，频率1500Hz，每次3min，间歇1min，共5次。然后置冰箱冷冻室，反复冻融3次；最后于4℃下离心（10000转/min）1h，上清液即为粗抗原。经UV-210紫外分光光度计280/260nm波长测定，计算出各蛋白浓度分别为0.034mg/ml、0.044mg/ml、0.026mg/ml，分装置-20℃备用。
1.3.3 血吸虫组分抗原的制备 （1）取雌、雄虫和虫卵粗抗原各1.5ml，分别沿管壁缓缓加入层析管（纤维素层析柱），使纤维素与抗原物质之间形成界面混匀状态。（2）待粗抗原渗入层析柱后，再用0.0175mol/L pH 6.3缓冲液不断滴入层析管，进行洗脱。（3）层析管下端用华氏试管收集洗脱液，每管收集3ml，每种抗原各收集18管。（4）测定3组各管内洗脱液的OD值，分别得出3个峰值；各收集峰值前后OD值较高的2～3管洗脱液混合，即可获得雌、雄虫和虫卵3种纯化组分抗原。通过SDS-PAGE和Western blot分析，组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分，去除了多数与日本血吸虫免疫无关蛋白（待发表）。（5）经岛津UV-210紫外分光光度计280/260nm波长测定，计算出各组分蛋白浓度分别为0.034mg/ml、0.044mg/ml和0.026mg/ml，分装后置-20℃保存备用。
1.4 快速斑点免疫渗滤试验
1.4.1 稀释抗原 用pH9.6 0.05 mol/L碳酸盐缓冲液分别稀释3种抗原，其中雌、雄虫组分抗原稀释至2μg/ml；虫卵组分抗原稀释至0.5μg/ml。
1.4.2 NC圆片制作 用内径0.7mm的打孔器将NC片切割成小圆片，在蒸馏水中浸泡1h，取出晾干。
1.4.3 抗原片制作 用6个等大的大头针柄分别蘸取6种稀释抗原，印滴在硝NC正面的中央，点样直径为1.7mm，晾干后备用。然后，将晾干的NC小圆片浸于封闭液中2h，晾干后即为抗原片。试验前，用细胞培养板作载体，将抗原片贴在该自制的FDIFA反应板孔中的垫料上，孔内垫料为吸水性强的纸质。再用双面胶将抗原片贴于中央带有1.3mm小圆孔的橡胶垫圈，然后置于细胞培养板孔中垫料的上面（贴紧），置-20℃保存备用。
1.4.4 用细滴管在抗原片上滴加pH7.0 TBS，每片3滴，逐一缓滴，置28～30℃1min（下同）。
1.4.5 按序号将1：10的稀释血清50μl滴加在抗原片上，待干。
1.4.6 用细滴管在抗原片上滴加pH7.0 TBS，每片3滴，逐一缓滴，洗涤。
1.4.7 用移液器将1：10 000酶标结合物，每片50μl，待渗入。
1.4.8 用细滴管向抗原片上滴加pH7.0 TBS，每片3滴，逐一缓滴，洗涤。
1.4.9 用移液器在抗原片上滴加50滴底物溶液，待5min。若硝酸纤维素膜的中央出现灰蓝色斑，即为阳性；而无色或仅为极淡蓝色斑，则为阴性。
1.5 酶联免疫吸附试验
1.5.1 稀释抗原 用pH9.6 0.05 mol/L碳酸盐缓冲液分别稀释3种抗原，其中雌、雄虫组分抗原稀释至2μg/ml；虫卵组分抗原稀释至0.5μg/ml。
1.5.2 包被酶标反应板 用稀释过的3种抗原各100μl分别包被酶标反应板，平放湿盒内（密封，下同），置4℃下8h。
1.5.3 取出反应板，弃去包被液，用含1%BSA的pH7.0 TBS100μl封闭，4℃下过夜。
1.5.4 弃去封闭液，用pH7.0 TBS洗涤液冲洗3遍，甩干。然后，于每孔加入1：100稀释样本血清，每孔100μl，并设阳性、阴性和空白对照，置37℃孵育1h。
1.5.5 弃去样本液，用pH7.0 TBS冲洗3遍，拍干。加1：10 000酶标结合物（HRP-SPA），每孔100μl，置37℃孵育1h。
1.5.6 以上法冲洗、甩干后，加入现配制的底物，每孔100μl，置暗盒(密封)，室温下15min。
1.5.7 目测结果 若出现蓝色反应则为阳性。深蓝色为+++，明显蓝色为++，淡蓝色为+；无色或极淡蓝色则为阴性。
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